分子生物学技术

分子生物学技术平台

分子生物学技术

1、DNA提取
DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,我公司提供从各种不同来源的样品(如细菌、真菌、血液、培养细胞、动物组织及植物组织等)中提取高纯度基因组DNA的服务。
2、RNA提取
不同组织总RNA提取实质是将细胞裂解,释放出RNA,并通过不同方式去除蛋白、DNA等杂质,最终获得高纯RNA产物的过程。目前普遍使用的RNA提取法有两种:基于异硫氰酸胍/苯酚混合试剂的液相提取法(即Trizol类试剂)和基于硅胶模特异性吸附的离心柱提取法。
Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍和酚等物质,能迅速破碎细胞和溶解细胞中的其它成分,抑制细胞释放出核酸酶,维持细胞RNA的稳定,加入氯仿离心后,RNA进入水相,再用异丙醇沉淀水相中RNA,即可达到提取总RNA的目的。

材料种类 样品要求 起始量 收量
血液 新鲜血液及抗凝剂处理的全血 100μl 0.1~0.3ug
培养细胞 离心收集的细胞 1×106 10μg左右
动物组织 一般材料 100 mg 100 μg左右
植物 一般材料 100 mg 10 μg左右

服务说明:
1)细胞样品需新鲜培养;动物组织、植物组织等样品取样后需液氮速冻。2)用于提取总RNA的血液样品需在-80℃下保存。3)实验样品最好使用干冰运输。
3、RT-PCR
操作流程:从细胞或特定组织中提取总RNA—逆转录实验—扩增内参和目的基因并比较基因表达差异。
服务要求:1.客户须在实验开始前确保其细胞或组织中有目的基因的表达。2.RT-PCR过程中的所需引物,您可以委托本公司设计合成,也可以由您提供。3.引物必须是PAGE纯化的高质量的干粉,一般我们不接受已溶解的引物。

实验实例:

4、Real-time PCR
Real-Time PCR技术,是在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析,避免了传统PCR以终产物监测定量产生的偏差,提高实验的重复性。该技术已经被广泛用于监测细胞mRNA表达量的变化;比较不同组织的mRNA表达差异;验证基因芯片,siRNA干扰的实验结果。服务要求同RT-PCR。

实验实例:

5、载体构建
本平台凭借长期分子生物学工作的丰富经验,集中人力,为您提供更高效、快捷的载体构建服务,过表达目的基因或降低某基因的表达。

实验实例:

6、转染
常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。后者也称稳定转染,外源DNA既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体(episome)存在。本平台的服务内容包括脂质体转染法、磷酸钙-DNA共沉淀法、电穿孔转染法及病毒感染法。

瞬时转染:

7、Western blot
实验流程:细胞或组织蛋白样品制备—蛋白定量—电泳(Electrophoresis)—转膜(Transfer)—封闭(Blocking)—一抗孵育(Primary antibody incubation)—二抗孵育(Secondary antibody inucubation)—蛋白检测(Detection of proteins)—膜的重复利用(Membrane recovery)—数据分析。

实验实例:

8、免疫沉淀
免疫沉淀是利用抗原蛋白和抗体特异性结合,以及细菌蛋白prorein A/G可特异地结合到抗体的FC片段的原理衍生出来的实验方法。免疫沉淀实验用途非常广泛,而且基于最基本的免疫沉淀实验衍生出了许多免疫沉淀相关实验手段(比如免疫共沉淀、染色质免疫沉淀和RNA-蛋白免疫沉淀)。
实验流程:1. 样品处理;2. 样品、抗体与Protein A/G sepharose孵育;3. 抗原、抗体与Protein A/G sepharose复合物洗涤;4. 沉淀产物鉴定(Western blot)。

实验实例: